PCR實驗室建設四要素
李達達 2024-11-28 16:36:05 25038閱讀
1 試劑準備區(qū)
用于試驗試劑的準備。該區(qū)域為正壓，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個區(qū)域：普通提取試劑的準備區(qū)、PCR試劑準備區(qū)和PCR主反應液準備區(qū)。在普通提取試劑的準備區(qū)內(nèi)準備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復冷凍和解凍，試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積，儲存在這個房間以備后用：PCR主反應液準備區(qū)將進行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽性對照、供應品、或設備)帶進試劑準備區(qū)。
2 樣品準備區(qū)
該區(qū)域無壓力設置要求。該區(qū)域是用于對樣品進行分樣，將樣品進行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應嚴格隔離，應放在與后面的三個區(qū)域隔開的獨立的房間中。在樣品準備區(qū)內(nèi)還可設立一個專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存，應該和樣品準備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準備區(qū)域的人員不得進入試劑準備區(qū)。
3 核酸提取區(qū)
核酸提取區(qū)是進行樣品核酸提取的區(qū)域。該區(qū)域為負壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區(qū)又包括從樣品中進行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時，陽性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開操作，以避免模板添加時造成交叉污染
重要提示：這個房間里的一切物品不得帶人試劑準備區(qū)。
4 擴增和產(chǎn)品檢測區(qū)
該區(qū)域是用來進行PCR擴增和PCR分析的。PER儀放置在這個區(qū)域。房間保持負壓，目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服
和手套，在離開房間前脫去，防止擴增子污染其它地點。所有用于擴增和產(chǎn)品檢測的設備要指定用于這個房間。PCR分析]二作也設置在該區(qū)域，例如：酶切、測序、克隆等，但實驗室應盡可能把這些活動分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴增產(chǎn)物的污染風險。如果沒有條件在該區(qū)域設立負壓，此區(qū)域必須建立排風裝置。
重要提示：這個房間的物品不能帶人樣品準備區(qū)或試劑準備區(qū)。
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